寵物犬血清新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)抗體的檢測報(bào)告
----針對多地犬的血清檢測結(jié)果看新冠病毒是否感染犬
林德貴1，鄧均華2，田克恭3，蔣書東4，張潤5，霍家奇6
（1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會小動物醫(yī)學(xué)分會；2.洛陽普泰生物技術(shù)有限公司；3.國家獸用藥品工程技術(shù)研究中心；4.合肥天紅動物醫(yī)院；5.深圳維特動物醫(yī)院；6.武漢芭比堂動物醫(yī)院；）
新型冠狀病毒肺炎疫情下，人與動物的安全是我們當(dāng)今社會的公共衛(wèi)生大事之一。為了及時(shí)診斷家養(yǎng)寵物犬是否面臨新冠病毒的感染，我們啟動了寵物犬血清新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)抗體的檢測。本項(xiàng)目在國家權(quán)威的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，采樣、運(yùn)輸、保管、樣本處置、實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)、檢測方法與操作，均符合國家的相關(guān)要求。
1 技術(shù)原理
采用雙抗原夾心ELISA反應(yīng)原理，酶標(biāo)板上包被SARS-CoV-2重組蛋白S1抗原，待檢樣品中的SARS-CoV-2特異性抗體與包被的重組蛋白S1抗原結(jié)合，加入含HRP標(biāo)記SARS-CoV-2重組蛋白S1抗原的酶標(biāo)試劑進(jìn)行溫育。當(dāng)樣品中存在SARS-CoV-2抗體時(shí)，不管是IgM還是IgG抗體，都將形成"包被抗原-抗體-酶標(biāo)抗原"復(fù)合物，復(fù)合物上連接的HRP催化顯色劑反應(yīng)，生成藍(lán)色產(chǎn)物，終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色。若樣品中無SARS-CoV-2抗體，則不顯色。
2材料
2.1 臨床血清：深圳維特寵物醫(yī)院犬血清8份，安徽某寵物醫(yī)院犬血清9份，武漢某寵物醫(yī)院犬血清6份，?？谀硨櫸镝t(yī)院4份。
2.2 陽性血清：SARS-CoV-2重組蛋白S1抗原免疫犬血清，編號001，國家獸用藥品工程技術(shù)研究中心提供。
2.3試劑盒：新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)雙抗原夾心ELISA抗體檢測試劑盒，批號：E22A2003S，洛陽普泰生物技術(shù)有限公司研發(fā)生產(chǎn)。
3 試驗(yàn)方法：
3.1按照試劑盒說明書對不同來源的犬血清分別進(jìn)行檢測。
3.2試劑盒結(jié)果計(jì)算方法
臨界值（CUTOFF）計(jì)算：臨界值=0.16+陰性對照孔OD值均值（陰性對照孔OD值均值低于0.03者以0.03計(jì)算）。
3.3試劑盒結(jié)果判定
樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為SARS-CoV-2抗體陽性；樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為SARS-CoV-2抗體陰性。
4試驗(yàn)結(jié)果
試劑盒檢測SARS-CoV-2重組蛋白S1抗原免疫犬血清為陽性，27份臨床犬血清均為陰性，詳見附表1。結(jié)果表明，不論是在新冠肺炎疫情最為嚴(yán)重的武漢，還是安徽、深圳、?？诘纫咔檩p微的省份，寵物犬均未發(fā)生新冠病毒感染。
抗體檢測是證明犬是否被新冠病毒感染的科學(xué)證據(jù)，抗體陰性科學(xué)地證明這些犬并未被新冠病毒感染；更加深入的第二階段擴(kuò)大研究正在進(jìn)行中。希望本研究結(jié)果對于我們正確認(rèn)識當(dāng)前疫情下的動物健康起到有益的幫助，尊重生命、相信科學(xué)。
作者：2020年3月5日星期四于北京
